案例分類
2024年06月03日
重組蛋白通常使用大腸桿菌、酵母、哺乳動物細胞表達擴增，用昆蟲細胞和植物細胞生產(chǎn)重組蛋白的案例也愈發(fā)常見。
發(fā)酵液在經(jīng)過適宜的澄清、裂解、超濾、萃取、離心等預(yù)處理方法后，即可獲得待純化樣本。在之后的純化過程里，經(jīng)常依靠離子和/或親和層析完成粗純化和中度純化。精純化則常用疏水、分子篩、以及復(fù)合模式填料。而像胰島素和GLP-1等小分子則非常依賴RP填料、SEC填料。為保證足夠高的活性，有時還需要進行手性分離純化。
對于小分子重組蛋白，可以使用融合蛋白策略，方便采用適配的親和層析，配合酶切方法，快速獲取高純度中間品，一般再經(jīng)1-2步層析后就能夠滿足純度標(biāo)準(zhǔn)。若采用偶聯(lián)配體的方法，在偶聯(lián)修飾后則需要再純化，去除修飾錯誤的分子和未結(jié)合的單體。
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